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LipoTF 2000 Plus转染试剂是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸转染到真核细胞中。

LipoTF 2000 Plus转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

LipoTF 2000 Plus转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine 2000 Reagent完全一致，转染效率也和Lipofectamine 2000 Reagent相当甚至略高。

LipoTF 2000 Plus转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。

LipoTF 2000 Plus转染试剂转染过表达质粒后，通常24-48h后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48h显著高于转染后24h；转染siRNA通常3～5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。

LipoTF 2000 Plus转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中血清影响，即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染4-6h后可去除转染液。

以96孔板转染单个DNA质粒计算，750μL的LipoTF 2000 Plus转染试剂（高效款）可做1500个孔。

• 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。
  
• 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
  
• 需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM培养液或普通的DMEM培养液。
  
• LipoTF 2000 Plus转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。
  
• LipoTF 2000 Plus转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、DNA转染
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计
算。大部分细胞系所使用的DNA（μg）与LipoTF 2000 Plus转染试剂（μL）的比值为1:2到1:3，转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。优化转染是必需的（见优化质粒DNA转染）。

• 贴壁细胞：转染前一天每孔0.5～2×10⁵个细胞接种于500μL不含抗生素的培养基中，在转染时细胞可长至70～90%融合。
  悬浮细胞：在配制转染液前每孔4～8×10⁵个细胞接种于500μL不含抗生素的培养基中。
  
• 转染液制备，每孔细胞用量如下：
  
  • 用50μL Opti-MEM低血清培养基（或者其他无血清培养基）稀释质粒DNA，轻轻混匀。
    
  • 使用前轻轻摇匀LipoTF 2000 Plus转染试剂，然后取适量LipoTF 2000 Plus转染试剂在50μL Opti-MEM培养基中稀释，室温孵育5min。注意：请在25min内进行下一步操作。
    
  • 将前两步所稀释的DNA和LipoTF 2000 Plus转染试剂混合（使总体积为100μL），轻轻混匀，室温放置20min（溶液可出现浑浊）。
    注：转染复合物常温下可在6h内保持稳定。
• 在每孔细胞中加入100μL转染液，轻轻摇匀。
  
• 37℃培养18-48h后检测基因表达，转染4-6h后可更换培养基。
  对于稳定转染，在转染24h后以1:10稀释接种于新鲜培养基中，第二天可加入选择培养基。
  
• 优化DNA转染：
  可通过改变细胞密度、质粒DNA密度和LipoTF 2000 Plus转染试剂浓度以优化转染。要保证细胞融合在90%以上，DNA (μg):LipoTF 2000 Plus转染试剂(μL)可在1:0.5到1:5之间进行调整。

二、RNAi或siRNA转染
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按每孔计算。

• 转染前一日，将细胞接种于500μL不含抗生素的培养基中，使其在转染时长至30～50%融合。
  
• 转染液制备，每孔细胞用量如下：
  
  • 用50μL Opti-MEM低血清培养基（或者其他无血清基）稀释20 pmoL siRNA（转染时siRNA终浓度为33 nM），轻轻混匀。
    
  • 使用前轻轻摇匀LipoTF 2000 Plus转染试剂，然后取1μL LipoTF 2000 Plus转染试剂在50μL Opti-MEM培养基中稀释，室温孵育5min。
    注意：请在25min内进行下一步操作。
    
  • 将前两步所稀释的RNA和LipoTF 2000 Plus转染试剂混合（使总体积为100μL），轻轻混匀，室温放置20min（溶液可出现浑浊）。
• 在每孔细胞中加入100μL转染液，轻轻摇匀。37℃培养24-96h后检测基因表达，转染4-6h后可更换培养基。
  
• siRNA转染优化：
  可调整siRNA与LipoTF 2000 Plus转染试剂的用量以优化转染，在24孔板，siRNA可在10-50 pmoL之间调整，LipoTF 2000 Plus转染试剂可在0.5～1.5μL之间调整，在增加细胞密度时也应优化转染剂量。

三、转染规模调整
不同培养材料转染液、细胞和培养基的用量按照培养材料面积换算。在96孔板细胞高通量自动分析系统，推荐每孔使用50μL转染液。
注：在96孔板，可将细胞直接接种于转染液中以实现快速转染，直接在培养板中配制转染液100μL，直接将细胞加入培养板中，其密度为上述方法的2倍，细胞在转染液中可正常贴壁。

培养 材料	接种 培养基	稀释用 Opti-MEM	DNA转染		siRNA转染
			DNA	LipoTF	siRNA	LipoTF
96孔板	100μL	2×25μL	0.2μg	0.5μL	5 pmoL	0.25μL
24孔板	500μL	2×50μL	0.8μg	2.0μL	20 pmoL	1.0μL
12孔板	1mL	2×100μL	1.6μg	4.0μL	40 pmoL	2.0μL
6孔板	2mL	2×250μL	4.0μg	10μL	100 pmoL	5.0μL
60-mm	5mL	2×0.5mL	8.0μg	20μL	200 pmoL	10μL
10-cm	15mL	2×1.5mL	24μg	60μL	600 pmoL	30μL

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